特異性診斷是為確定變態(tài)反應(yīng)性疾病者的血清或組織中存在著哪些抗體而作的診斷性測定。變態(tài)反應(yīng)性哮喘的特異性檢查方法有以下六種,但應(yīng)結(jié)合病史等進(jìn)行綜合診斷。
(1)皮膚試驗(yàn)
皮膚試驗(yàn)是最常用的特異性檢查,包括斑貼、劃痕、挑刺和皮內(nèi)注射等。臨床上以挑刺和皮內(nèi)試驗(yàn)最為常用,如挑刺試驗(yàn)陰性,可作皮內(nèi)試驗(yàn)復(fù)查。
①方法與原理:特異性患者接觸過敏原后,可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性IgE,此種抗體粘附于皮膚或粘膜下層的肥大細(xì)胞表面的IgE受體上,當(dāng)它與再次進(jìn)入體內(nèi)的過敏原相遇形成1個(gè)過敏原與2個(gè)IgE抗體的橋連,致使肥大細(xì)胞內(nèi)發(fā)生一系列生化過程,釋放過敏介質(zhì),在皮膚局部產(chǎn)生風(fēng)團(tuán), 紅暈或瘙癢。在患者前臂內(nèi)側(cè),常規(guī)消毒,然后用OT針筒,4號注射針頭吸入不同種過敏原浸液分別注于前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)0.02ml,抗原點(diǎn)之間距為2.5cm。皮膚試驗(yàn)15～20分鐘后,觀察皮膚反應(yīng),局部風(fēng)團(tuán)及紅暈大小,與對照點(diǎn)相比較。
②結(jié)果判斷: a.陰性: 無丘疹及紅暈,或非常輕微的紅暈; b.可疑:紅暈小于0.5cm。C.陽性:伴有紅暈的風(fēng)團(tuán)0.5;伴有紅暈的風(fēng)團(tuán)0.5～1.0cm;伴有紅暈的風(fēng)團(tuán)大于1cm 但無偽足;伴有紅暈的風(fēng)團(tuán)大于1.5cm,并有偽足。
③皮膚試驗(yàn)應(yīng)注意的事項(xiàng): a.囑病人在皮膚試驗(yàn)前24～48小時(shí),停用抗組織胺藥物及皮質(zhì)激素,但不必停用喘藥。B.皮膚試驗(yàn)中,除觀察局部即發(fā)反應(yīng)外,還應(yīng)注意觀察病人有無胸悶、氣急、面色蒼白、出冷汗、皮膚瘙癢的皮疹等全身反應(yīng),一旦發(fā)現(xiàn)應(yīng)及時(shí)處理,以免發(fā)生危險(xiǎn)。C.囑病人回家后,在72小時(shí)內(nèi)繼續(xù)觀察有否遲緩反應(yīng)。D.對可疑過敏原高度敏感者,盡量不作皮內(nèi)試驗(yàn),以免發(fā)生意外。
(2)放射過敏原吸附試驗(yàn)
放射過敏原吸附試驗(yàn),它是特異性過敏原體外測定方法之一,是國外首選的體外診斷方法。它同其他體外測定方法一樣,最大的優(yōu)點(diǎn)是絕對安全,可完全避免體內(nèi)方法可能發(fā)生的過敏反應(yīng) ,同時(shí)不會(huì)有使病人致敏或增加病人敏感性的危險(xiǎn),尤其對高度敏感的兒童特應(yīng)性患者更為適宜。該試驗(yàn)與支氣管激發(fā)試驗(yàn)的符合率為80%左右,與皮膚試驗(yàn)的符合率在70%～80%,與白細(xì)胞組織胺釋放試驗(yàn)的相關(guān)系數(shù)為0.84。該試驗(yàn)使用離體血清,便于運(yùn)輸和保存,在方法上敏感性, 特異性和重復(fù)性均很高,易于自動(dòng)化,因此在國外是廣泛應(yīng)用而僅次于皮膚試驗(yàn)的測定方法。但該試驗(yàn)需要的放射性同位素,價(jià)格昂貴,半衰期短,操作和處理均需要專門的設(shè)備,使其廣泛應(yīng)用受到一定的限制。
①方法與原理:交聯(lián)于固相載體的可溶性過敏原與含有對過敏特異性IgE的標(biāo)本作用,加入同位素標(biāo)記的抗人IgE,使它再與結(jié)合在過敏原上的IgE相作用,用γ計(jì)數(shù)器測定結(jié)合的同位素活性,待測標(biāo)本中IgE抗體的濃度與測得的同位素活性成正比。
②結(jié)果判斷:以核素脈沖數(shù)大于正常人平均值(需減去臍血放射性計(jì)數(shù)脈沖數(shù)值)3.5倍以上判定為陽性。
③激發(fā)試驗(yàn)
目前常用的激發(fā)試驗(yàn)有眼結(jié)膜、鼻內(nèi)及支氣管粘膜激發(fā)試驗(yàn)。該試驗(yàn)是唯一直接判斷支氣管哮喘較為敏感的試驗(yàn),其結(jié)果與患者過敏史、臨床癥狀和放射性過敏原吸附試驗(yàn)的結(jié)果之間有較好的相關(guān)性,在哮喘的病因診斷、臨床療效考核等方面有重要的作用,受到國內(nèi)外重視。但需要一定的檢測條件及技術(shù),并易引起患者的嚴(yán)重發(fā)作,故臨床應(yīng)用上受到限制。
①支氣管激發(fā)試驗(yàn)的方法與原理:用各種可疑致敏原浸液讓患者霧化吸入后,觀察有無哮喘的發(fā)作,并作肺功能測定,從而判斷患者支氣管對各種特異性致敏原的反應(yīng)性。
②結(jié)果判斷:凡試驗(yàn)中出現(xiàn)哮喘發(fā)作,或吸致敏原浸液后,FEV1下降大于15%～25%者為陽性。
③激發(fā)試驗(yàn)的注意事項(xiàng): A.呼吸道感染或肺功能明顯減退者不做該項(xiàng)檢查。B.患者在做試驗(yàn)前,至少12小時(shí)停用β-受體激動(dòng)劑和磷酸二脂酶抑制劑,24小時(shí)前停止用色甘酸鈉,48時(shí)前停用抗組織胺藥物,96小時(shí)前停用羥嗪類藥物。C.吸入致敏原浸液后至少應(yīng)觀察30分鐘,有條件者應(yīng)觀察24小時(shí),便于發(fā)現(xiàn)遲緩反應(yīng)和雙相反應(yīng)。D.病人感到反應(yīng)較重時(shí),應(yīng)及時(shí)處理,或及時(shí)吸入氣管解痙劑。
(4)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),簡稱ELISA,是特異性過敏原體外測定方法之一。ELISA的特異性和敏感性與放射過敏原吸附試驗(yàn)相似。它除了有放射過敏原吸附試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)外,而且還有相對廉價(jià)、無核素污染，安全和結(jié)合物相對穩(wěn)定的特點(diǎn)。在診斷塵螨過敏中,ELISA和放射過敏原吸附試驗(yàn)的符合率達(dá)95%,ELISA與皮膚試驗(yàn)的符合率為89.5%。
①方法與原理:先將過敏原吸附在聚苯乙烯板或管壁上,當(dāng)加入的待測血清含有特異性抗體時(shí),抗體便能與相應(yīng)的過敏原結(jié)合,再加入酶標(biāo)記的抗IgE和相應(yīng)的底物便可產(chǎn)生一定的顏色反應(yīng),用分光光度計(jì)測定其光密度,可推知特異性IgE的含量。
②結(jié)果判斷:以高于正常人光密度平均值一倍定為陽性。
(5)白細(xì)胞組織胺釋放試驗(yàn)
白細(xì)胞組織胺釋放試驗(yàn)是變態(tài)反應(yīng)主要測定方法之一,白細(xì)胞組織胺釋放試驗(yàn)與皮試、臨床癥狀和特異性IgE之間均有密切關(guān)系。一些報(bào)告指出,在變態(tài)反應(yīng)性疾病診斷中,以臨床病史為對照,白細(xì)胞組織胺釋放試驗(yàn)為90%。
但此試驗(yàn)有操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、實(shí)驗(yàn)需血量較多、使用血儲(chǔ)存不便的缺點(diǎn)。
①白細(xì)胞組織胺釋放試驗(yàn)的方法與原理:由肝素抗凝白細(xì)胞分離,加抗原溫育,然后用正丁醇苯和鹽酸反苯提取組織胺，將組織胺與重結(jié)晶后的鄰苯二醛縮合,可在熒光分光光度計(jì)下測定。
②結(jié)果測定:組胺釋放率＞50%為陽性。
(6)人嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)
該試驗(yàn)從細(xì)胞水平上反映了機(jī)體的過敏狀態(tài),為一敏感的體外測定方法?？勺鰹棰裥妥儜B(tài)反應(yīng)性疾病尋找特異性過敏原的有效手段。此試驗(yàn)雖實(shí)驗(yàn)條件要求簡單,但操作上較為費(fèi)時(shí),重復(fù)性也較其他方法略差。
①原理:嗜堿粒細(xì)胞胞漿內(nèi)的顆粒能被堿性染料染成藍(lán)色,極易辨認(rèn)和計(jì)數(shù)。當(dāng)加入抗原后, 即與結(jié)合在細(xì)胞上的IgE產(chǎn)生橋連,導(dǎo)致胞漿內(nèi)的顆粒脫出,不再被染色,致使染色的細(xì)胞明顯減少。
②結(jié)果判斷:染色細(xì)胞減少率＞30%定為陽性。
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